Методы разделения альбуминов и глобулинов

После достижения полной экстракции белков , то есть перевода белков в растворенное состояние, приступают к разделению — фракционированию смеси белков на индивидуальные белки. Для этого применяют разнообразные методы: высаливание , тепловую денатурацию , осаждение органическими растворителями , хроматографию , электрофорез , распределение в двухфазных системах, кристаллизацию и др.

Дорогие читатели! Наши статьи рассказывают о типовых способах решения проблем со здоровьем, но каждый случай носит уникальный характер.

Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему - начните с программы похудания. Это быстро, недорого и очень эффективно!


Узнать детали

Биохимия: Лабораторный практикум

Для разделения белков и пептидов применяют разнообразные методы: высаливание, тепловую денатурацию, осаждение органическими растворителями, хроматографию, электрофорез, распределение в двухфазных системах и др. Растворение белков в воде связано с гидратацией каждой молекулы, что приводит к образованию вокруг белковой глобулы гидратных оболочек, состоящих из ориентированных в определенной форме в пространстве молекул воды.

Растворы белков отличаются крайней неустойчивостью, и под действием разнообразных факторов, нарушающих гидратацию, белки легко выпадают в осадок. Поэтому при добавлении к раствору белка любых водоотнимающих средств спирт, ацетон, концентрированные растворы нейтральных солей щелочных металлов , а также под влиянием физических факторов нагревание, облучение и др.

На этих принципах основывается метод высаливания. Метод очистки белков, основанный на различиях в их растворимости при разной концентрации соли в растворе. Соли щелочных и щелочноземельных металлов вызывают обратимое осаждение белков, то есть после их удаления белки вновь приобретают способность растворяться, сохраняя при этом свои нативные свойства. Чаще всего для разделения белков методом высаливания используют разные концентрации солей сульфата аммония.

Чем выше растворимость белка, тем большая концентрация соли необходима для его высаливания. Наибольшее распространение получили хроматографические и электрофоретические методы разделения белков. Хроматографические методы, основанны на распределении веществ между двумя фазами, одна из которых подвижная, а другая неподвижная. В основу хроматографических методов положены разные принципы: гель-фильтрации, ионного обмена, адсорбции, биологического сродства.

Метод разделения белков с помощью гель-фильтрационной хроматографии основан на том, что вещества, отличающиеся молекулярной массой, по-разному распределяются между неподвижной и подвижной фазами.

Хроматографическая колонка заполняется гранулами пористого вещества сефадекс, агароза и др. В его структуре образуются поперечные связи и формируются гранулы с "порами", через которые легко проходят вода и низкомолекулярные вещества. В зависимости от условий можно формировать гранулы с разной величиной "пор". Неподвижная фаза - жидкость внутри гранул, в которую способны проникать низкомолекулярные вещества и белки с небольшой молекулярной массой.

Смесь белков, нанесённую на хроматографическую колонку, вымывают, пропуская через колонку растворитель. Вместе с растворителем движутся и самые крупные молекулы. Более мелкие молекулы диффундируют внутрь гранул сефадекса и на некоторое время попадают в неподвижную фазу, в результате чего их движение задерживается. Величина пор определяет размер молекул, способных проникать внутрь гранул. Так как гелевая структура сефадекса легко деформируется под давлением, гели стали заменять более жёсткими матрицами сефактил, той-оперл , представляющими сферические гранулы с разными размерами пор.

Выбор размеров пор в гранулах зависит от целей хроматографии. Метод основан на том, что при определённом значении рН и ионной силы раствора белки двигаются в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, двигаются к аноду, а положительно заряженные белки - к катоду. Электрофорез проводят на различных носителях: бумаге, крахмальном геле, полиакриламидном геле и др. В отличие от электрофореза на бумаге, где скорость движения белков пропорциональна только их суммарному заряду, в полиакриламидном геле скорость движения белков пропорциональна их молекулярным массам.

Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле выше, чем на бумаге. Электрофорез тех же белков в полиакриламидном геле позволяет получить до 18 различных фракций. Для обнаружения белковых фракций полоски бумаги или столбики геля обрабатывают красителем чаще всего бромфеноловым синим или амидовым чёрным.

Окрашенный комплекс белков с красителем выявляет расположение различных фракций на носителе. Так же как и электрофорез, метод основан на разделении белков, различающихся суммарным зарядом при определённых значениях рН и ионной силы раствора.

При пропускании раствора белков через хроматографическую колонку, заполненную твёрдым пористым заряженным материалом, часть белков задерживается на нём в результате электростатических взаимодействий. В качестве неподвижной фазы используют ионообменники - полимерные органические вещества, содержащие заряженные функциональные группы. Различают положительно заряженные анионообменники, среди которых наиболее часто используют диэтиламиноэтилцеллюлозу ДЭАЭ-целлюлозу , содержащую катионные группы, и отрицательно заряженные катионообменники, например карбоксиметилцеллюлозу КМ-целлюлозу , содержащую анионные группы.

Выбор ионообменника определяется зарядом выделяемого белка. Так, для выделения отрицательно заряженного белка используют анионообменник. При пропускании раствора белка через колонку прочность связывания белка с анионообменником зависит от количества отрицательно заряженных карбоксильных групп в молекуле. Белки, адсорбированные на анионообменнике, можно смыть буферными растворами с различной концентрацией соли, чаще всего NaCI, и разными значениями рН.

Ионы хлора связываются с положительно заряженными функциональными группами анионообменника и вытесняют карбоксильные группы белков. Метод разделения основан на различии в молекулярных массах белков. Скорость оседания веществ в процессе вращения в ультрацентрифуге пропорционально их молекулярной массе. На поверхность буферного раствора, помещённого в кювету, наносят тонкий слой смеси белков.

Кювету помещают в ротор ультрацентрифуги. При вращении ротора в течение ч более крупные молекулы с большей молекулярной массой оседают в буферном растворе с большей скоростью. В результате в кювете происходит расслоение смеси белков на отдельные фракции с разной молекулярной массой. После расслоения белковых фракций дно кюветы прокаливают иглой и по каплям собирают содержимое небольшими порциями в пробирки.

Это наиболее специфичный метод выделения индивидуальных белков, основанный на избирательном взаимодействии белков с лигандами, прикреплёнными к твёрдому носителю. В качестве лиганда может быть использован субстрат или кофермент, если выделяют какой-либо фермент, антигены для выделения антител и т.

Через колонку, заполненную иммобилизованным лигандом, пропускают раствор, содержащий смесь белков. К лиганду присоединяется только белок, специфично взаимодействующий с ним; все остальные белки выходят с элюатом. Белок, адсорбированный на колонке, можно снять, промыв её раствором с изменённым значением рН или изменённой ионной силой.

Аффинная хроматография отличается высокой избирательностью и помогает очистить выделяемый белок в тысячи раз. Биохимия: Учеб. Файловый архив студентов. Логин: Пароль: Забыли пароль? Email: Логин: Пароль: Принимаю пользовательское соглашение. FAQ Обратная связь Вопросы и предложения. Добавил: Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам. Методы разделения белков и пептидов. Скачиваний: Содержание 1. Методы разделения белков и пептидов 2.

Высаливание 3. Гель-фильтрация, или метод молекулярных сит 4. Электрофорез белков 5. Ионообменная хроматография 6. Ультрацентрифугирование 7. Аффинная хроматография, или хроматография по сродству Список использованной литературы 1.

Методы разделения белков и пептидов Для разделения белков и пептидов применяют разнообразные методы: высаливание, тепловую денатурацию, осаждение органическими растворителями, хроматографию, электрофорез, распределение в двухфазных системах и др.

Высаливание Метод очистки белков, основанный на различиях в их растворимости при разной концентрации соли в растворе. Гель-фильтрация, или метод молекулярных сит Метод разделения белков с помощью гель-фильтрационной хроматографии основан на том, что вещества, отличающиеся молекулярной массой, по-разному распределяются между неподвижной и подвижной фазами.

Электрофорез белков Метод основан на том, что при определённом значении рН и ионной силы раствора белки двигаются в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Ионообменная хроматография Так же как и электрофорез, метод основан на разделении белков, различающихся суммарным зарядом при определённых значениях рН и ионной силы раствора.

Ультрацентрифугирование Метод разделения основан на различии в молекулярных массах белков. Аффинная хроматография, или хроматография по сродству Это наиболее специфичный метод выделения индивидуальных белков, основанный на избирательном взаимодействии белков с лигандами, прикреплёнными к твёрдому носителю. Список использованной литературы 1. Соседние файлы в предмете Химия

Белковые фракции в сыворотке

Через 10 минут образовавшийся осадок отфильтровывают через складчатый фильтр. При различных острых и хронических заболеваниях, а также в результате действия многих повреждающих факторов внешней среды, таких как тяжелые металлы, окислители, органические растворители, хлорпроизводные, фосфорорганические соединения, вибрация, ультразвук и т. Выявление таких изменений имеет существенное клинико-диагностическое значение. В разделении белковых фракций сыворотки крови основное значение принадлежит электрофорезу. Принцип этого метода основан на способности заряженных частиц в том числе белков перемещаться под действием электрического поля в зависимости от знака их заряда.

Справочник химика 21

Осаждение белков обычно производят сульфатом аммония NH4 2SO4. Основные белки сыворотки крови делятся на несколько фракций. В крови определяется общий белок. При инфекционных заболеваниях увеличивается содержание -глобулиновой фракции. Проламины и глютелины.

Методы разделения (фракционирования) белков

По всем вопросам, связанным с COVID , включая заявки на выполнение тестирования, обращайтесь по телефону. Услуг заказано: 0 На сумму: 0 руб. Результаты поиска: Количество результатов: 0. Версия для печати. Определение количественных и качественных изменений основных фракций белка крови, используемое для диагностики и контроля лечения острых и хронических воспалений инфекционного и неинфекционного генеза, а также онкологических моноклональных гаммапатий и некоторых других заболеваний. Общий белок сыворотки крови включает в себя альбумин и глобулины, которые в норме находятся в определенном качественном и количественном соотношении. Оно может быть оценено с помощью нескольких лабораторных методов. Электрофорез белков в агарозном геле — это метод разделения белковых молекул, основанный на различной скорости их движения в электрическом поле в зависимости от размера, заряда и формы. При разделении общего белка сыворотки крови удается выявить 5 основных фракций. При проведении электрофореза белковые фракции определяются в виде полос различной ширины с характерным, специфичным для каждого типа белка местоположением в геле.

Основную массу растворимых нелетучих веществ плазмы крови образуют белки. В плазме крови человека содержится около различных белков.

III. Фракционное высаливание белков. Разделение альбуминов и глобулинов

.

.

.

ВИДЕО ПО ТЕМЕ: Норма АЛТ и АСТ в анализе крови? Зачем они нужны?

Комментариев: 3

  1. lenok_3082:

    Витамин С разрушается уже при 70 градусах… Он что, лишний в этом напитке?

  2. airin88:

    Разница в возрасте ничего не значит!!!! Все верно!!! Интеллектуальная и сексуальная совместимость вот , что главное в счастливых браках!!!!!!! И материальное благополучие!!!!!!

  3. svetlana_kandrateva:

    Мы медики не ходим к медикам…. А что к людям? К обычным людям… Мы патриоты и остались работать, но мы не ходим к контактным…. Мы рискуем… но лечить не будем. Правильно! Во всём “Путин Виноват!” )))